多功能酶標(biāo)儀是實(shí)驗(yàn)室中常用的精密檢測(cè)儀器,憑借其能同時(shí)檢測(cè)多種信號(hào)的特點(diǎn),廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、醫(yī)學(xué)研究、藥物開(kāi)發(fā)、環(huán)境監(jiān)測(cè)等多個(gè)領(lǐng)域。以下是其常見(jiàn)用途的詳細(xì)介紹:
一、常規(guī)光吸收檢測(cè)(比色法)
這是酶標(biāo)儀最基礎(chǔ)的功能,通過(guò)檢測(cè)樣品對(duì)特定波長(zhǎng)光的吸收值來(lái)分析物質(zhì)濃度或反應(yīng)情況。
生化指標(biāo)檢測(cè):如檢測(cè)血清或細(xì)胞培養(yǎng)液中的葡萄糖、膽固醇、尿素氮、轉(zhuǎn)氨酶等含量,常用于臨床診斷或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中的生理指標(biāo)分析。
微生物生長(zhǎng)監(jiān)測(cè):通過(guò)測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)菌或真菌培養(yǎng)液在 600nm 左右波長(zhǎng)的吸光度,繪制生長(zhǎng)曲線,了解微生物的生長(zhǎng)速率和生長(zhǎng)階段。
二、熒光檢測(cè)
利用熒光物質(zhì)被激發(fā)光照射后發(fā)出的熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量分析,靈敏度遠(yuǎn)高于比色法,適用于微量物質(zhì)檢測(cè)。
熒光探針檢測(cè):例如使用鈣熒光探針(如 Fura-2)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度變化,研究細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo);或通過(guò)熒光標(biāo)記的抗體檢測(cè)特定蛋白質(zhì)的表達(dá)量(熒光免疫分析)。
核酸定量與定性:使用 SYBR Green 等熒光染料嵌入 DNA 雙鏈,通過(guò)熒光強(qiáng)度定量核酸濃度;也可用于實(shí)時(shí)熒光定量 PCR(qPCR)的終點(diǎn)檢測(cè)或 melting curve 分析(部分酶標(biāo)儀支持)。
細(xì)胞活性與凋亡檢測(cè):如采用 Hoechst 染色檢測(cè)細(xì)胞核形態(tài)變化(凋亡特征),或使用熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)分析基因表達(dá)調(diào)控。
三、化學(xué)發(fā)光與生物發(fā)光檢測(cè)
基于化學(xué)反應(yīng)或生物反應(yīng)產(chǎn)生的光信號(hào)進(jìn)行檢測(cè),靈敏度非常高,適合超微量物質(zhì)分析。
化學(xué)發(fā)光免疫分析:如檢測(cè)激素(如甲狀腺激素、性激素)、腫瘤標(biāo)志物(如 CEA、AFP)等,通過(guò)抗原 - 抗體反應(yīng)結(jié)合化學(xué)發(fā)光底物(如魯米諾)產(chǎn)生的光信號(hào)定量分析。
生物發(fā)光檢測(cè):利用螢火蟲(chóng)熒光素酶、海腎熒光素酶等報(bào)告基因,監(jiān)測(cè)基因啟動(dòng)子活性、細(xì)胞信號(hào)通路激活情況,或用于活體成像前的體外預(yù)實(shí)驗(yàn)。
四、細(xì)胞水平分析
多功能酶標(biāo)儀常搭配細(xì)胞培養(yǎng)板(如 96 孔板、384 孔板),用于高通量細(xì)胞功能檢測(cè)。
細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè):如通過(guò) CCK-8 法、MTT 法檢測(cè)細(xì)胞存活率(增殖)或藥物對(duì)細(xì)胞的毒性(抑制率),廣泛應(yīng)用于藥物篩選。
細(xì)胞凋亡與壞死檢測(cè):使用 Annexin V - 熒光染料(如 FITC)結(jié)合 PI 染色,通過(guò)熒光信號(hào)區(qū)分凋亡早期、晚期及壞死細(xì)胞。
細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激檢測(cè):如利用 DCFH-DA 探針檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)水平,評(píng)估環(huán)境因素或藥物對(duì)細(xì)胞的氧化損傷。
五、其他特殊檢測(cè)
時(shí)間分辨熒光(TRF)檢測(cè):通過(guò)延遲檢測(cè)時(shí)間消除背景熒光干擾,常用于稀土元素標(biāo)記的免疫分析(如鑭系元素螯合物),提高檢測(cè)特異性。
熒光偏振(FP)檢測(cè):基于熒光分子轉(zhuǎn)動(dòng)速度的變化,分析分子間相互作用(如蛋白質(zhì) - 小分子結(jié)合、DNA - 蛋白質(zhì)結(jié)合),適用于藥物篩選中的靶點(diǎn)結(jié)合實(shí)驗(yàn)。
AlphaScreen( Amplified Luminescent Proximity Homogeneous Assay ):一種均相檢測(cè)技術(shù),通過(guò)微珠 proximity 效應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光,用于檢測(cè)蛋白質(zhì) - 蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì) - 核酸等相互作用,無(wú)需洗滌步驟,適合高通量篩選。
總結(jié)
多功能酶標(biāo)儀的核心優(yōu)勢(shì)在于高通量、多模式檢測(cè),能滿足從分子水平(核酸、蛋白質(zhì))到細(xì)胞水平的多種實(shí)驗(yàn)需求,是現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室中藥物研發(fā)、基礎(chǔ)科研、臨床診斷等領(lǐng)域重要的工具。不同型號(hào)的酶標(biāo)儀在檢測(cè)模式、靈敏度、通量上可能存在差異,需根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)需求選擇。