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三維細胞培養(yǎng)系統(tǒng)關(guān)于細胞培養(yǎng)的問題解答

更新時間:2017-07-05瀏覽:2385次
  三維細胞培養(yǎng)系統(tǒng)如今很好的應(yīng)用在科研實驗中,今天就來介紹細胞培養(yǎng)的一些常見問題解答:
  1.冷凍管應(yīng)如何解凍?
  取出冷凍管后須立即放入37℃水浴箱中快速解凍,輕搖冷凍管使其在1分鐘內(nèi)全部融化,并注意水面不可超過冷凍管蓋沿,否則易發(fā)生污染情形。
  2.可否使用與原先培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基?
  不能;每一細胞株均有其特定使用且已適應(yīng)之細胞培養(yǎng)基,若驟然使用和原先提供之培養(yǎng)條件不同之培養(yǎng)基,細胞大都無法立即適應(yīng),造成細胞無法存活。
  3.懸浮性細胞應(yīng)如何繼代處理?
  一般僅需持續(xù)加入新鮮培養(yǎng)基于原三維細胞培養(yǎng)系統(tǒng)角瓶中,稀釋細胞濃度即可,若培養(yǎng)液太多時,可將培養(yǎng)角瓶口端稍微抬高,直到無法容納為止。分瓶時取出一部份含細胞之培養(yǎng)液至另一新的培養(yǎng)角瓶,加入新鮮培養(yǎng)基稀釋至適當濃度,重復(fù)前述步驟即可。
  6.欲將一般動物細胞離心下來,其離心速率應(yīng)為多少轉(zhuǎn)速?
  欲回收動物細胞,其離心速率一般為1,000rpm),5-10分鐘,過高之轉(zhuǎn)速,將造成細胞死亡。
  7.細胞之接種密度為何?
  依照細胞株基本數(shù)據(jù)上之接種密度或稀釋分盤之比例接種即可。細胞數(shù)太少或稀釋的太多亦是造成細胞無法生長之一重要原因。
  8.冷凍保存細胞之方法?
  方法一:冷凍管置于4℃30~60分鐘→(-20°C30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽長期儲存。
  方法二:冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3°C至–80℃以下,再放入液氮槽長期儲存。
  -20℃不可超過1小時,以防止冰晶過大,造成細胞大量死亡,亦可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。
  9.購買之細胞死亡或細胞存活率不佳可能原因?
  研究人員在細胞培養(yǎng)時出現(xiàn)存活率不佳,常見原因可歸納為:
  培養(yǎng)基使用錯誤或培養(yǎng)基品質(zhì)不佳。血清使用錯誤或血清的品質(zhì)不佳。解凍過程錯誤。冷凍細胞解凍后,加以洗滌細胞和離心。懸浮細胞誤認為死細胞。培養(yǎng)溫度使用錯誤。細胞置于80℃太久。
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