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定量PCR儀的分子生物學(xué)研究

更新時間:2016-08-08瀏覽:2333次
   定量PCR儀是在定性PCR技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來的核酸定量技術(shù)。實時熒光定量PCR技術(shù)是一種在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用對熒光信號積累的實時檢測來監(jiān)測整個PCR進程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。目前定量PCR儀已廣泛應(yīng)用于分子生物學(xué)研究和醫(yī)學(xué)研究等領(lǐng)域。
  定量PCR儀的分子生物學(xué)研究:
  1)基因表達研究:細胞因子是一種調(diào)節(jié)蛋白,它對免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)具有重要的調(diào)節(jié)作用,包括對淋巴細胞激活、增生、分化、存活和凋亡的調(diào)節(jié)。這些低分子蛋白由淋巴細胞、單核細胞和內(nèi)皮細胞所分泌,其量的改變常常與一些疾病,如炎癥反應(yīng)、自身免疫性疾病、移植排斥反應(yīng)等有密切的關(guān)系。由于所得到組織樣本常常因為太小而不能滿足在蛋白質(zhì)水平的檢測,另外,通常用的蛋白質(zhì)檢測方法的靈敏度也難以完成對極微量的蛋白產(chǎn)物的檢測,所以應(yīng)用PCR檢測細胞因子mRNA表達水平就顯得很有意義。實驗研究表明:定量結(jié)腸直腸癌淋巴結(jié)的癌抗原mRNA的表達量,可以作為診斷癌癥微轉(zhuǎn)移的重要依據(jù)。
  2)單核苷酸多態(tài)性及突變分析:實時熒光定量PCR儀一個誘人的應(yīng)用前景是用于檢測基因突變和基因組的不穩(wěn)定性。基因突變的檢測基于兩條探針,一條探針橫跨突變位點,另一條為錨定探針,與無突變位點的靶序列雜交,兩條探針用兩種不同的發(fā)光基團標(biāo)記。如靶序列中無突變,探針雜交便會降低雜交體的穩(wěn)定性,從而降低其熔解溫度。這樣便可對突變和多態(tài)性進行分析。拉米夫定是有效治療慢性乙型肝炎的抗病毒藥物,但臨床應(yīng)用中不斷有病毒變異的報道,這些變異可能是治療失敗或病毒對治療無反應(yīng)的原因。實時熒光定量PCR儀可以監(jiān)測乙型肝炎患者服用拉米夫定后體內(nèi)是否產(chǎn)生耐藥突變病毒。
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